潔凈區的環(huán)境監測如何操作

潔凈區的環(huán)境監測如何操作

潔凈區潔凈等級劃分為：

級：指高風(fēng)險操作區，如：灌裝、放置膠塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的區域及無(wú)菌裝配或連接操作的區域。通常用層流操作臺（罩）來(lái)維持該區的環(huán)境狀態(tài)。

B級：指無(wú)菌配制和灌裝等高風(fēng)險操作X級區所處的背景區域。

C級和D級：指生產(chǎn)無(wú)菌藥品過(guò)程中重要程度較次的潔凈操作區。

此外還有一些諸如CNC， 百級、千級、之類(lèi)的概念，這里不做展開(kāi)討論。

目錄

一溫濕度

二靜壓差

三噪音

四照度

五沉降菌

六浮游菌

一、溫濕度

標準規定：潔凈區的溫度和相對濕度與藥品生產(chǎn)工藝要求相適應。無(wú)特殊要求時(shí)，潔凈區溫度為18℃～26℃，相對濕度控制在45%～65%。有特殊要求車(chē)間根據工藝控制。

溫度觀(guān)察：檢查溫濕度計是否完整，視線(xiàn)正對溫濕度計水平讀取顯示的數據，需要記錄的應立即填入表格中。

濕度觀(guān)察：視線(xiàn)正對濕度表，準確讀數。需記錄的應立即填入表格中。

需要加水的濕度計，在觀(guān)察前應檢查在蓄水腔內是否有水，無(wú)水則需加入適量水，再觀(guān)察濕度。

潔凈區的溫濕度每天至少記錄兩次，上午一次，下午一次。

設備計量人員每年至少組織校驗一次監控系統的儀器設備。

二、靜壓差

標準規定：潔凈區與非潔凈區之間、不同等級潔凈區之間的壓差應不低于10帕斯卡，相同潔凈度等級不同功能的操作間之間應保持2-3帕的壓差梯度，以防止污染和交叉污染。

產(chǎn)塵房間與相鄰房間呈相對負壓。

潔凈區的靜壓差以微壓差計顯示，每日至少記錄兩次，上午一次，下午一次。（包括潔凈區與室外，不同潔凈級別間及所有有壓測試時(shí)所有的空調系統和層流系統應處于連續的正常運行狀態(tài)。

潔凈室所有的門(mén)應關(guān)閉，測試時(shí)不允許有人穿越房間。

當發(fā)現監測結果超出標準規定的范圍時(shí)，應立即檢查原因，必要時(shí)對空調系統進(jìn)行調整。

三、噪音

標準規定：潔凈區噪音不得高于70分貝。

潔凈區的噪音檢查每年不得少于一次，在經(jīng)過(guò)設備大修、廠(chǎng)房改造、工藝布局調整等變更的時(shí)候應在變更結束后重新檢測噪音。

檢測方法:檢測點(diǎn)布置，當面積≤50m2時(shí)，僅測房間中心一個(gè)點(diǎn)；當房間面積較大時(shí)，每增加50m2增加一個(gè)點(diǎn)，測點(diǎn)距在1.2m。

四、照度

標準規定：潔凈區主要操作間照度不得少于300勒克斯，一般照明的照度均勻度不應小于0.7。

潔凈區的照度檢查每年不得少于一次，在經(jīng)過(guò)設備大修、廠(chǎng)房改造、工藝布局調整等變更的時(shí)候應在變更結束后重新檢測照度。

檢測要求：室內照度測度必須在室溫已趨穩定，光源光輸出趨于穩定后進(jìn)行（對熒光燈必須有100h）。

檢測方法:測點(diǎn)平面離地面0.85m，按間距1-2m布點(diǎn)，測點(diǎn)距墻面1m。其要求基本與潔凈度的測定位置要求相同。記錄實(shí)測照度值并計算總的平均照度。

照度測量一般僅測定除局部照明之外的一般照明。

五、沉降菌

5.1 方法概述

本測試方法利用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數，以平板培養皿中的菌落數來(lái)評定潔凈環(huán)境內的活微生物數，并以此來(lái)評定潔凈區的潔凈度。

5.2 使用的儀器和設備

高壓消毒鍋：使用時(shí)應嚴格按照操作規程進(jìn)行。

恒溫培養箱：必須定期對培養箱的溫度計進(jìn)行檢定。

培養皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培養皿。使用前將培養皿置于121℃濕熱滅菌20min。

培養基：普通營(yíng)養瓊脂培養基。將培養基加熱熔化，冷卻至約45℃在無(wú)菌操作條件下將培養基注入培養皿，每皿約15ml。待瓊脂培養基凝固后，將培養基平皿放入30～35℃恒溫培養箱中培養48小時(shí)，若培養基平皿上確無(wú)菌落生長(cháng)，即可供采樣用，制備好的培養基平皿應在2～8℃的環(huán)境中存放。

5.3 測試步驟

采樣：將已制備好的培養皿放置在預先確定取樣點(diǎn)，打開(kāi)培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5h，再將培養皿蓋上蓋后倒置。

培養:在30～35℃培養，時(shí)間為5天。每批培養基應有對照試驗，檢查培養基本身是否污染，可每批選定3只培養皿作對照培養。

菌落計數：用肉眼直接計數，然后用5～10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計數。

5.4 測試狀態(tài)

沉降菌測試前，被測試潔凈區的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差必須控制在規定值內。

沉降菌測試前，被測試潔凈區已經(jīng)過(guò)消毒。

測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。

5.5 測試人員

測試人員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時(shí)，室內測試人員不得多于2個(gè)人。

5.6 測試時(shí)間

對單向流，如X級凈化房間內及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開(kāi)始。對非單向流，如B級、C級、D級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘開(kāi)始。

5.7 沉降菌采樣點(diǎn)

采樣點(diǎn)數目及其布置：最少采樣點(diǎn)數目：沉降菌的最少采樣點(diǎn)數可按表1確定。在滿(mǎn)足最少測點(diǎn)數的同時(shí)，不宜滿(mǎn)足最少培養皿數，見(jiàn)表2。

表1最少采樣點(diǎn)數目

表2最少培養皿數

5.8 采樣點(diǎn)的布置

工作區測試點(diǎn)位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）?？稍陉P(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測點(diǎn)，采樣點(diǎn)的布置應力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某局部區域過(guò)于集中，某局部區域過(guò)于稀疏。

5.9 結果計算

用計數方法得出各個(gè)培養皿的菌落數。

平均菌落數的計算見(jiàn)下式：

式中：m為平均菌落數；

m1為1號培養皿菌落數；

m2為2號培養皿菌落數；

mn為n號培養皿菌落數；

n為培養皿總數。

結果評定：用平均菌落數判斷潔凈室的空氣中的微生物。

潔凈區內的平均菌落數必須符合所選定的評定標準。見(jiàn)表3。

若某潔凈區的菌落數超過(guò)評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結果必須合格。

重新測試仍不合格，按“潔凈室環(huán)境監控管理規程"進(jìn)行超標調查。

5.10 注意事項

測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

采取一切措施防止人為對樣本的污染。

對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

由于細菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計數時(shí)一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀(guān)察，不要漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

采樣前應仔細檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量，如發(fā)現變質(zhì)、破損或污染的應剔除。

六、浮游菌

6.1 取樣前準備工作

依據檢測區域的取樣點(diǎn)數，按照《培養基配制、滅菌標準操作程序》制備適量的營(yíng)養瓊脂培養基。

在超凈工作臺內，以無(wú)菌操作法將配制好的營(yíng)養瓊脂培養基以每皿約15ml的裝量分裝，待培養基凝固后移出潔凈區。

將制備的營(yíng)養瓊脂平皿倒置于隔水式恒溫水浴培養箱內于30～35℃培養48小時(shí)。取出逐個(gè)檢查，確認無(wú)菌落數后即可使用。

6.2 采樣

將上述制備好的營(yíng)養瓊脂平皿交與QA人員取樣。

6.3 儀器、設備和培養基

浮游菌采樣器、培養皿（φ90mm×15mm）、培養基（營(yíng)養瓊脂培養基）、恒溫培養箱

6.4 儀器、設備、培養基的要求

浮游菌采樣器必須要有流量計和定時(shí)器。應嚴格按儀器說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行操作。采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數據的可靠性，檢驗項目有：定時(shí)器，轉盤(pán)轉速，流量計。每次測試前應先接通電源，啟動(dòng)真空抽氣泵，然后調節流量計和定時(shí)器?？諝獠蓸恿扛鶕枰x定，已知采樣器的流量（L/min）,設定采樣時(shí)間（min）兩者相乘即得采樣量（L）。采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩定的材料制造，采樣管?chē)澜麧B漏，內壁應光滑，采樣管的長(cháng)度應根據測定點(diǎn)的高度定，盡量減少彎曲。

6.5 測試方法

測試用儀器、培養皿表面必須嚴格消毒。采樣器進(jìn)入被測房間前先用消毒劑滅菌。用消毒劑擦凈培養皿的外表面。采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂盤(pán)、轉盤(pán)以及罩子的內外面，采樣結束再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤(pán)。采樣口及采樣管使用前必須高溫滅菌，如用消毒劑對采樣管的外壁、內壁進(jìn)行消毒，應將管中的殘留液倒掉并晾干。采樣者應穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤(pán)上放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒。

6.6 采樣程序

儀器經(jīng)消毒后先不放入培養皿，開(kāi)動(dòng)真空泵抽氣，使儀器的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并調好流量、轉盤(pán)轉速。關(guān)閉真空泵，放入培養皿，蓋上蓋子后調節采樣品縫隙高度。置采樣器于采樣點(diǎn)后，開(kāi)啟采樣器、轉動(dòng)定時(shí)器，根據采樣量設定采樣時(shí)間。

6.7 測試狀態(tài)

浮游菌測試前微生物限度檢查室已經(jīng)消毒過(guò)。測試狀態(tài)為靜態(tài)測試，并在報告中注明測試狀態(tài)。

6.8 測試人員

測試人員必須穿戴符和被測環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時(shí)，室內人員不得多于2人。

6.9 測試時(shí)間

對單向流，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10min后開(kāi)始。對非單向流，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30min后開(kāi)始。

最少采樣點(diǎn)數目及其布置，最小采樣量，見(jiàn)下表:

工作區測點(diǎn)位置離地0.8m～1.5m左右，送風(fēng)口測點(diǎn)位置離開(kāi)送風(fēng)面30cm左右；可在關(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測點(diǎn)。每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。對于單向流或送風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應離開(kāi)塵粒較集中的回風(fēng)口1m以上。采樣時(shí)，測試人員應站在采樣口的下風(fēng)側。

6.10 培養

取樣結束后將平皿復倒置隔水式恒溫水浴培養箱內于30～35℃培養48小時(shí)。并以未采樣的營(yíng)養瓊脂平皿作對照皿。

菌落計數：用肉眼直接計數，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否遺漏。若培養皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)，仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計數。培養結束，將上述培養后的平皿取出，逐個(gè)點(diǎn)計菌落數，必要時(shí)用放大鏡檢查，并記錄。

6.11 結果計算

平均菌落數的計算見(jiàn)下式：

平均菌落數m=

式中：

m為該房間（或區域）的平均菌落數；

m1、m2‥‥‥mn為該房間（或區域）各取樣點(diǎn)的菌落數；

N為培養皿總數

記錄：測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態(tài)及測試數據。